1.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(1)灌胶前的准备：a) 洗板；b)配板
(2)凝胶的配制
(3)灌胶
(4)样品制备、上样
(5)电泳
2、转移蛋白质到硝酸纤维素薄膜上
(1)准备转移缓冲液。
(2)切割与胶尺寸相符的硝酸纤维素薄膜，并用转移缓冲液浸湿，放置15 min直到没有气泡。
(3)切割8张普通滤纸，其大小与胶尺寸大小相符，并将其浸泡在有转移缓冲液的培养皿中(与硝酸纤维素薄膜分开浸泡)。
(4)电泳后，切取有用部分的胶，并很快地在转移缓冲液中洗涤。
(5)打开蛋白质转移槽的盖板，依次放入：
①4张用转移缓冲液浸泡过的滤纸；
②用转移缓冲液洗过的胶，并小心地赶走滤纸和胶之间的所有气泡；
③放上硝酸纤维素膜；
④另4张用转移缓冲液浸泡过的滤纸。
(6)小心地合上转移槽的盖板；
(7)插入电极，注意正负极方向(硝酸纤维素膜面向阳极)，转膜装置置于冰水中，打开电泳仪开关，调至胶的面积(cm2)×0.8 mA，1~2 h。
(8)转移结束后打开盖板取出硝酸纤维素薄膜。转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色，以观察实际的转膜效果。从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。
3、免疫印迹膜的处理
(1)用TBST缓冲液洗膜3次，每次10-15 min。
(2)将膜用封闭溶液封闭，用摇床轻摇4℃过夜或室温封闭1h。
(3)用TBST缓冲液洗膜3次，每次10-15 min。
(4)将膜置于第一抗体溶液中，置摇床上轻摇，37℃摇动1-2 h，或4℃缓慢摇动孵育过夜。
(5)回收一抗，并用TBST洗膜3次，每次10-15 min。
(6)将膜置于辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG溶液中，37℃轻摇1 h。
(7)回收二抗，并用TBST洗膜3次，每次10 min。
(8)最后用TBS溶液洗，以转移Tween-20。
(9)加底物溶液反应2～10min，至抗原区带显色清楚为止。
(10)用去离子水洗涤，以终止反应。将膜夹在滤纸间，干燥。置暗处保存。