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 技术文章
石蜡免疫组化参考实验步骤
作者:江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源:  发表时间:[2011-4-16]  点击:3445

1. 常规石蜡切片60烤片2小时;

2. 脱蜡。二甲苯脱蜡15min,两次;

3. 水化。依次用无水乙醇、95%90%80%70%,各一次2min,之后在蒸馏水中孵育5min

4. PBSpH7.4)浸泡5min

5. 抗原修复:高压修复(EDTApH8.00.01M枸橼酸钠缓冲溶液,pH6.0高压10-15min),PBS2-3min

6. 3% H2O2去离子水37孵育10minPBS洗;

7. 正常山羊血清封闭,37孵育10-20min勿洗

8. 适当比例的一抗工作液孵育,4过夜或37 1h

9. 复温20minPBS3min,三次;

10. 二抗孵育:加生物素化标记二抗,3710-15minPBS3min,三次;

11. 三抗孵育:加辣根酶标记的链酶卵白素,3710-15minPBS3min,三次;

12. DAB显色剂显色,镜下观察结果,适时终止;

13. 苏木素复染5min,自来水冲洗片刻,75%的盐酸酒精溶液分化30s,自来水冲洗5min蓝化;

14. 脱水。依次经过70%80%90%95%、无水乙醇,各2min,二甲苯15min,三次;

15. 封片,中性树胶封片。

光学显微镜100×或400×观察,拍片。

图象评分。

 

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