免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。
一、实验材料：
上样buffer的配方(用前现配):
2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.8
35ul distilled water
2.5ul 2-mercaptoethanol
12.5ul 10%SDS
10ul 80% glycerol
2ul bromphenol blue
TNE buffer:
10mM Tris-HCl pH 8.0
10mM NaCl
0.5mM EDTA
二、实验方法：
1．用含有1% NP40的缓冲液重悬细胞，充分振荡；
2．在冰上孵育30分钟或37℃孵育10—15分钟；
3．转入eppendorf管中离心3分钟；
4．将上清轻轻倒入一干净试管，加入40—50 ul抗血清；
5．冰上孵育2小时或4℃过夜；
6．在TNE中加入100ul SPA 和100ul 5% BSA；
7．冰上孵育2小时；
8．离心使免疫复合物成球，用1ml含1%NP40,0.5% Na deoxychloate, 0.1% SDS 的TNE,在用超声波重悬；
9．加入70ul的上样缓冲液，振荡；
10．热水中水浴90秒，离心1分钟，保留上清；
11．若不立即实验请低温保存。