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 技术文章
免疫沉淀(IP)实验步骤
作者:江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源:  发表时间:[2011-3-8]  点击:1283

免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。

一、实验材料:

上样buffer的配方(用前现配):

2ul        1.25M Tris-HCL , pH 6.8

35ul       distilled water

2.5ul       2-mercaptoethanol

12.5ul      10%SDS

10ul       80% glycerol

2ul        bromphenol blue

TNE buffer:

10mM Tris-HCl pH 8.0

10mM NaCl

0.5mM EDTA

二、实验方法:

1.用含有1% NP40的缓冲液重悬细胞,充分振荡;

2.在冰上孵育30分钟或37孵育10—15分钟;

3.转入eppendorf管中离心3分钟;

4.将上清轻轻倒入一干净试管,加入40—50 ul抗血清;

5.冰上孵育2小时或4过夜;

6.在TNE中加入100ul SPA 100ul 5% BSA

7.冰上孵育2小时;

8.离心使免疫复合物成球,用1ml1%NP40,0.5% Na deoxychloate, 0.1% SDS TNE,在用超声波重悬;

9.加入70ul的上样缓冲液,振荡;

10.热水中水浴90秒,离心1分钟,保留上清;

11.若不立即实验请低温保存。

 

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