识别区域的选择原则一般说来最理想的抗原性识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。既要考虑其免疫原性、特异性,还需考虑其合成难度等。通常有以下几点建议:
1、序列长度在8-20个氨基酸残基之间(如果太短,就有多肽太特殊、所产生的抗体与天然蛋白之间的亲和力(结合能力)不够强的风险,同样,如果序列长度超过20,将有可能引入二级结构,所产生的抗体失去特异性的可能,而且肽链越长,通常合成难度增大,不易获得高纯度的产品);
2、尽可能是在蛋白表面;
3、保证该段序列不形成α-helix;
4、N,C端的肽段比中间的肽段更好;避免蛋白内部重复或接近重复段的序列;
5、避免同源性太强的肽段;
6、交联可以交联在N,C两端,选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端;
7、序列中不能有太多的Pro,但有一两个Pro有好处,可以使肽链结构相对稳定一些,对产生特异性抗体有益。