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 技术文章
细胞免疫组化参考实验步骤
作者:江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源:抗体技术部  发表时间:[2011-11-5]  点击:3070

1. 细胞爬片;

2. PBS清洗标本 3次,各1 min

3. 冷丙酮4固定15min(或用4%多聚甲醛室温固定10~20min);

4. 空气干燥5minPBS漂洗3min3次;

5. 细胞通透:0.5% Triton X-100(溶于PBS)通透细胞,室温15~30min(丙酮固定法不用此步骤);

6. PBS漂洗2次,每次5min

7. 3% H2O2去离子水室温孵育10minPBS洗;

8. 正常山羊血清封闭,37孵育10~20min,甩掉封闭液,勿洗

9. 加适当比例的一抗工作液孵育,4过夜或37 1~2h

10.  PBS漂洗2次,每次5min

11. 加入酶标二抗工作液,3730-60min

12. PBS漂洗2次,每次5min

13. DAB显色剂显色(或AEC显色),镜下观察结果,适时终止;

14. 苏木素轻度复染;

15. 脱水透明。

16. 封片,中性树胶封片。

光学显微镜观察,拍片。图象评分。

 

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