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人脂蛋白磷脂酶A2酶联免疫试剂盒说明书
作者:江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源:  发表时间:[2011-9-29]  点击:1277

人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)酶联免疫检测试剂盒使用说明书

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

用    途: 用于人血清、血浆及相关液体样本中脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的测定。

工作原理

本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的水平。向预先包被了人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)单克隆抗体的酶标孔中加入脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2),温育;洗涤后,加入HRP标记过的脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)抗体。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

1

标准品(48μg/L)

0.5ml

7

显色剂A液

6ml

2

标准品稀释液

3ml

8

显色剂B液

6ml

3

酶标包被板

12孔×8条

9

终止液

6ml

4

酶标试剂

6ml

10

说明书

1份

5

30倍浓缩洗涤液

20ml

11

封板膜

2张

6

样品稀释液

6ml

12

密封袋

1个

需要而未提供的试剂和器材

1.   37℃恒温箱

2.   标准规格酶标仪

3.   精密移液器及一次性吸头

4.   蒸馏水

5.   一次性试管

6.   吸水纸

注意事项

1.   从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.   各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

3.   建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用PBS稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

4.   严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

5.   为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6.   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.   底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

标本要求

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

操作程序

1.   标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):

24μg/L  (5号标准品) 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液

12μg/L  (4号标准品) 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液

6μg/L    (3号标准品) 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液

3μg/L    (2号标准品) 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液

1.5μg/L (1号标准品) 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液

2.   分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。轻轻晃动混匀,37℃温育30分钟。  

3.   弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

4.   每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育30分钟。 

5.   弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

6.   每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

7.   取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.   测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

9.   根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

操作程序总结:

准备试剂,样品和标准品

加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟

洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟

洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

检测范围:1μg/L→30μg/L

规格:    96T/盒

保存:    2-8℃

有效期:  6个月(2-8℃)。

 

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