会员登陆 / 下载中心
    产品分类
        抗体
   多克隆抗体磷酸化抗体
   二抗单克隆抗体
   免疫血清免疫球蛋白
        酶联免疫试剂盒
   人ELISA试剂盒大鼠ELISA试剂盒
   小鼠ELISA试剂盒兔ELISA试剂盒
   植物ELISA试剂盒其他种属
        免疫及细胞生物学试剂
   免疫组化试剂蛋白研究试剂
   细胞培养类细胞凋亡检测试剂
        生化及分子生物学试剂
   常规生化试剂核酸研究试剂
   PCR相关试剂克隆载体相关试剂
        实验室耗材和仪器
   进口实验室耗材国产实验室耗材
   实验仪器 
 
    友情连接
 
当前位置:首页 > 技术文章
 技术文章
冰冻切片参考实验步骤
作者:江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源:  发表时间:[2011-10-29]  点击:3028

切片制备:将组织块平放于软塑料盖或特制小盒内(直径2cm),如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾,此时小盒保持原位切勿浸入液氮内,大约10-20秒组织即迅速冰冻成块。取出组织冰块立即置入-80冰箱储存备用,或置于恒冷切片机冰冻切片。冰冻切片4~8mm,冰冻切片后如不染色,必须吹干,储存低温冰箱内,或进行短暂预固定后储存冰箱内保存。

1. 冰冻切片室温放置30分钟后,入4丙酮固定10分钟,也可根据需要选择其他方式。PBS洗,5min3次;

2. 3% H2O2去离子水37孵育10minPBS洗,5min2次;

3. 510%正常山羊血清封闭,37孵育10-20min,倾去血清,勿洗

4. 适当比例的一抗工作液孵育,4过夜或37 12h

5. 复温20minPBS3min,三次;

6. 二抗孵育:加生物素化标记二抗,3710-15minPBS3min,三次;

7. 三抗孵育:加辣根酶标记的链酶卵白素,3710-15minPBS3min,三次;

8. DAB显色剂显色(或AEC显色),镜下观察结果,适时终止;

9. 苏木素复染5min,自来水冲洗片刻,75%的盐酸酒精溶液分化30s,自来水冲洗5min蓝化;

10. 脱水。依次经过70%80%90%95%、无水乙醇,各2min,二甲苯15min,三次;

11. 封片,中性树胶封片。

光学显微镜100×或400×观察,拍片。

图象评分。
 

网站首页 | 公司动态 | 产品中心 | 定制服务 | 代理产品 | 技术专栏 | 客户留言 | 联系我们

Copyright @ 2011 All Rights Reserved 江苏镇江厚普生物科技有限公司 备案/许可证编号为:苏ICP备11043267号

地址:江苏省丹阳市吕城工业园 邮编:212300 电子邮箱:hopebiotech@163.com

订货电话:0511-86909515 传真:0511-86909515 访问量:10941984