一、细胞免疫荧光
1. 细胞爬片；
2. 冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室温固定10~20min）；
3. 空气干燥5min，PBS漂洗3min，3次；
4. 细胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透细胞，室温15~30min（丙酮固定法不用此步骤）；
5. PBS漂洗2次，每次5min；
6. 3% H2O2去离子水室温孵育10min，PBS洗；
7. 正常山羊血清封闭，37℃孵育10~20min，甩掉封闭液，勿洗；
8. 加适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1~2h；
9. PBS漂洗2次，每次5min；
10. 加入荧光二抗工作液，37℃，30-60min；
11. PBS漂洗2次，每次5min；
12. DAPI染色2~5min，PBS漂洗2次，每次5min；
13. 抗淬灭封片剂封片；
14. 荧光显微镜观察，拍片。
二、冰冻切片
1. 冰冻切片室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，也可根据需要选择其他方式。PBS洗，5min，3次；
2. 3% H2O2去离子水37℃孵育10min，PBS洗，5min，2次；
3. 5～10％正常山羊血清封闭，37℃孵育10-20min，倾去血清，勿洗；
4. 适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1～2h；
5. 复温20min，PBS洗3min，三次；
6. 加入荧光二抗工作液，37℃，30-60min；
7. PBS漂洗2次，每次5min；
8. DAPI染色2~5min，PBS漂洗2次，每次5min；
9. 抗淬灭封片剂封片；
10. 荧光显微镜观察，拍片。
三、石蜡切片
1. 常规石蜡切片60℃烤片2小时；
2. 脱蜡。二甲苯脱蜡15min，两次；
3. 水化。依次用无水乙醇、95%、90%、80%、70%，各一次2min，之后在蒸馏水中孵育5min；
4. 1×PBS（pH7.4）浸泡5min；
5. 抗原修复：高压修复（EDTA，pH8.0或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液，pH6.0高压10-15min），PBS洗2-3min；
6. 3% H2O2去离子水37℃孵育10min，PBS洗；
7. 正常山羊血清封闭，37℃孵育10-20min，勿洗；
8. 适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1h；
9. 复温20min，PBS洗3min，三次；
10. 加入荧光二抗工作液，37℃，30-60min；
11. PBS漂洗2次，每次5min；
12. DAPI染色2~5min，PBS漂洗2次，每次5min；
13. 抗淬灭封片剂封片；
14. 荧光显微镜观察，拍片。